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黃曲霉毒素M1

產品類別:免疫親和柱
發布日期:2014-08-20 13:29:20
規格型號:ZYD-HQMDSM1
商 家:北京智云達科技股份有限公司

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產品說明供應商信息配置清單

黃曲霉毒素M1免疫親和柱操作說明書

【概要】

黃曲霉毒素(Aflatoxin)是黃曲霉、寄生曲霉等真菌產生的次級代謝產物,被世界衛生組織的癌癥研究機構劃分為1類致癌物,同時又是一種毒性極強的劇毒物質,廣泛存在于各種食物中。玉米,花生,大米,小麥等谷物及其副產品是黃曲霉毒素的主要來源,同時飼料中的黃曲霉毒素B1經過動物代謝后產生的黃曲霉毒素M1仍然具有很強的毒性和致癌性,也廣泛存在牛奶,血液,組織等食品中。黃曲霉毒素作為肝癌的三大誘因之一,也是胃癌,腸癌等疾病的主要原因,對人類的健康構成很大威脅。世界各國對食品,飼料中的黃曲霉毒素都有嚴格的限量標準。2010年6月1日開始施行的乳品安全國家標準中對乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的檢測進行了規定,主要使用的樣品前處理方法就是免疫親和柱凈化法。


【適用范圍及性能】

用于定性、定量檢測牛奶,奶粉,發酵乳,干酪,奶油等樣品中黃曲霉毒素M1的樣品前處理。

柱容量:≥200ng

回收率:≥90%


【試驗原理】

本產品的測定的基礎是抗原抗體反應,黃曲霉毒素M1單克隆抗體連接在柱內凝膠上,樣品中的黃曲霉毒素M1經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢的通過黃曲霉毒素M1免疫親和層析柱,在免疫親和柱內,毒素與抗體結合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用甲醇洗脫黃曲霉毒素M1,然后注入到分析儀器中用于檢測。


【包裝組成】

根據不同規格,每一個盒中包含5-25支黃曲霉毒素免疫親和層析柱及1份說明書。


【需要而未提供的設備及試劑】

設備:

┅┅高速均質器或組織勻漿機

┅┅粉碎機

┅┅200mL/50mL量筒

┅┅天平:感量0.1g

┅┅酸度計

┅┅分液漏斗

┅┅微量移液器:單道 100?L~1000?L

┅┅槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)

┅┅50mL漏斗

┅┅旋轉蒸發儀

┅┅一次性玻璃試管

┅┅泵流操作架(包括空氣泵,不同容積的玻璃注射器等)

┅┅燒杯,容量瓶,錐形瓶等

試劑:

┅┅甲醇(色譜級)

┅┅乙腈(色譜級)

┅┅石油醚

┅┅蒸餾水或去離子水

┅┅氫氧化鈉溶液(0.5mol/L)稱取2g氫氧化鈉溶解于100mL水中


【樣本處理步驟】

(一)牛奶

┅┅將100mL牛奶水浴加熱至40 oC;

┅┅4000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用


(二)乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品

┅┅稱取10g奶粉樣品,將100mL50 oC水多次少量加入,攪拌,使奶粉充分溶解

┅┅6000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用


(三)發酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)

┅┅稱取60 g混勻的試樣,用0.5 mol/L 的氫氧化鈉溶液在酸度計指示下調pH至7.4;

┅┅用高速均質器在 9500 轉/分鐘下告訴勻漿5 min

┅┅水浴加熱至40 oC;

┅┅4000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用


(四)干酪

┅┅稱取經切細、過10目圓孔篩混勻的試樣5g置于50 mL離心管中,加2 mL水和30 mL甲醇;

┅┅用高速均質器在 9500r/分鐘下告訴勻漿5 min;

┅┅超聲提取30 min;

┅┅在6000r/分鐘下離心15 min,收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。

┅┅在分液漏斗中加入30 mL石油醚(4.3),振搖2 min;

┅┅待分層后,將下層移于50 mL燒杯中,棄去石油醚層。

┅┅重復用石油醚提取2次;。

┅┅將下層溶液移到100 mL圓底燒瓶中,減壓濃縮至約2 mL;┅┅濃縮液倒入離心管中,燒瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗滌,洗滌液一并倒入50 mL離心管中;

┅┅加水稀釋至約50 mL,在6000 轉/分鐘下離心 5 min,上清液供凈化處理。


(五)奶油

┅┅稱取5g試樣,置于50 mL燒杯中;

┅┅用20 mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。

┅┅加20 mL水和30 mL甲醇,振蕩30 min后,將全部液體移于分液漏斗中;

┅┅待分層后,將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中,在旋轉蒸發儀中減壓濃縮至約5 mL,加水稀釋至約50mL,供凈化處理。


【親和柱凈化步驟】

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL清澈液注入玻璃注射器;

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

┅┅在注射器中加入10ml水,調節壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

┅┅準確加入1mL色譜級乙腈洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。


【結果判定】

經免疫親和柱凈化后,收集到的乙腈洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測,也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑盒進行檢測。收集到的1ml洗脫液中的黃曲霉毒素含量相當于10ml牛奶樣品、發酵乳樣品或者1g奶粉樣品、干酪樣品和奶油樣品中黃曲霉毒素M1的含量。

如果HPLC檢測需要其它溶劑,可以將乙腈洗脫液氮氣吹干,然后復溶


【注意事項】

┅┅黃曲霉毒素危害極大,應戴手套操作。

┅┅使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過夜。

┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。


【貯藏條件及保存期】

貯藏條件:親和柱可于常溫保存,2-8℃儲存可延長有效期,不可凍存。

保存期:該產品有效期為12個月。










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